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蛋白質含量檢測方法概述

發(fā)布時間:2020/4/29   點擊次數(shù):2652次   文件下載    

蛋白含量檢測試劑盒(BCA法)

產品名稱

通用名:蛋白質含量檢測試劑盒(BCA法)

原理

在堿性環(huán)境下蛋白質分子中多肽鍵結構與Cu2+絡合并將Cu2+還原成Cu+BCACu+特異性結合成穩(wěn)定的紫色復合物,該復合物在562nm處有*的光吸收值,在一定范圍內,光吸收值與蛋白質濃度成正比,溶液顏色的深淺與蛋白質含量成正比,可根據(jù)光吸收值測定蛋白質濃度。

實驗試劑

試劑A     100ml   (4℃保存)

試劑B     30ml   (4℃保存)

4mg/ml BSA標準品    0.5ml   (-21℃保存)

儀器

酶標儀或分光光度計,工作波長540nm~590nm,*工作波長562nm,如無此波長,建議優(yōu)先使用490nm波長

適用范圍

不含還原劑的蛋白樣品。

實驗步驟

1. 工作液配制:將試劑A與試劑B50:1的比例混合均勻。

2. 標準品稀釋:用純化水將2mg/ml的BSA標準品依次稀釋為以下濃度16008004002001005025ug/ml。注意用純化水標記空白。

3. 參照下表上樣

 

空白

標準

待測

純化水ul

20

  

標準品ul

 

20

 

待測品ul

  

20

BCA工作液ul

200

200

200

充分混勻后,在37℃條件下孵育30分鐘或室溫下靜置2小時。

4. 在酶標儀或分光光度計上,以562nm波長下,空白管調0后測定各管OD值。

5. 以OD值為Y軸,標準品濃度為X軸繪制標準曲線。

6. 從標準曲線上查找待測樣品濃度,注意稀釋后的樣品所測濃度需乘以稀釋倍數(shù)。

說明

1. BCA法的檢測范圍是20-2000ug/ml,若樣本超過此范圍需再酌情稀釋。

2. 樣本中含有還原劑,EDTA或葡萄糖濃度大于10mM時不可直接使用BCA法,樣本經液體樣品蛋白抽取試劑沉淀后,可*去除干擾物質。

3. 在37℃孵育30分鐘或室溫下靜置2小時對檢測比較便利,但嚴格來講,此時反應尚未達到終點,通常每10分鐘A562OD值升高約2.3%,在10分鐘內測定不會影響精度。

4. 可測量吸附于固相支持物如酶標版、瓊脂糖、親和層析凝膠上的蛋白。

5. 本法僅適用于科研。

  

 

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